ELISA com resultado ruim?Siga-nos para escolher a placa Elisa correta.
Escolher uma placa de ELISA adequada é o primeiro passo para um experimento de ELISA bem-sucedido, mas muitas pessoas ignoram isso. Quando as pessoas fazem experimentos, geralmente consideram apenas o experimento em si, mas não sabem que o produto geralmente tem um grande impacto no experimento. A seleção adequada de produtos contribuirá para o sucesso do experimento. Normalmente, consideramos os seguintes fatores ao realizar experimentos ELISA:

1. A forma do fundo
Atualmente, os fabricantes projetam os poços marcados com enzimas como colunas independentes e aumentam adequadamente a distância entre os poços para que possam ser separados independentemente, minimizando assim a contaminação cruzada. Diferentes tipos de placas Elisa têm diferentes formas do fundo do poço. Aqui estão algumas formas comuns de fundo de furo:
Fundo plano: O fundo é horizontal, também chamado de fundo F. A luz não será desviada pela parte inferior, que pode transmitir a luz na maior extensão. Use para experimentos que exigem um fundo redondo para visibilidade ou outros motivos.
Fundo Redondo: Também conhecido como fundo em U, proporciona os melhores resultados de limpeza e desempenho híbrido, adequado para aplicações que precisam testar sedimentos.
C-bottom: Pode proporcionar um bom efeito de limpeza entre o fundo plano e o fundo redondo, combinando as vantagens do fundo plano.
Cone Bottom: Também conhecido como V-bottom, é adequado para amostragem precisa e armazenamento de microamostras para recuperação ideal de pequenos volumes.
2. A cor da placa Elisa
Existem três cores da placa Elisa: transparente, preto e branco.
A maioria dos ELISA escolhe placas transparentes como materiais experimentais. Placas Elisa brancas e pretas são geralmente usadas para detecção de luminescência. A própria placa ELISA preta absorve a luz, então seu sinal é mais fraco que o da placa ELISA branca. Placas Elisa pretas são geralmente usadas para detectar luz mais forte, como detecção de fluorescência; pelo contrário, as placas Elisa brancas podem ser usadas para detecção de luz mais fraca e são frequentemente usadas para quimioluminescência geral e desenvolvimento de cor de substrato (como luciferase dupla). análise do gene repórter).
3. O material da placa Elisa
Os materiais comuns são polietileno (PE), polipropileno (PP), poliestireno (PS), cloreto de polivinila (PVC) e policarbonato (PC).
Os materiais mais utilizados no ELSIA são o poliestireno e o cloreto de polivinila. A placa macia de cloreto de polivinila é fina, pode ser cortada e o preço é baixo. A desvantagem é que o acabamento não é tão bom quanto a placa de poliestireno, e o fundo do furo não é tão plano quanto o poliestireno. Mas o valor de fundo correspondente também aumentará. Normalmente, o tratamento de enxerto de íons é realizado na superfície da placa de ELISA e grupos funcionais ativos, como grupos aldeído, grupos amino e grupos epóxi, são introduzidos na superfície do polímero para melhorar o desempenho da superfície do substrato.
4. diferentes mecanismos de ligação
A ligação eficiente do material de revestimento à superfície inferior da placa é um passo crucial no ELISA. Portanto, as características estruturais e as propriedades químicas da substância a ser revestida devem ser cuidadosamente analisadas antes do experimento para selecionar uma placa Elisa adequada. De um modo geral, existem várias maneiras de ligar o material de revestimento ao fundo da placa: adsorção passiva, ligação covalente e captura por afinidade.
Adsorção passiva: O mecanismo de adsorção passiva é complexo, e a ligação entre o material de revestimento e o fundo da placa depende principalmente de forças intermoleculares (força de van der Waals) e ligações de hidrogênio. Na maioria dos ELISAs, a ligação da substância de revestimento ao fundo da placa é realizada por adsorção passiva. Geralmente, a ligação entre antígenos de peso molecular médio e grande (ou anticorpos) e o fundo da placa é realizada por adsorção passiva. As características hidrofóbicas/hidrofílicas da superfície inferior da placa são frequentemente consideradas ao selecionar uma placa Elisa. A tabela a seguir lista o escopo de aplicação e uso de diferentes superfícies de substrato hidrofílico:
hidrofílico | Vinculação de prioridade | O principal uso |
- | Moléculas contendo regiões hidrofóbicas significativas, como: lipídios, lipoproteínas, proteínas grandes | Antígeno ELISA, FlA, LIA |
mais | Biomoléculas com propriedades hidrofílicas/hidrofóbicas, tais como: proteínas médias a grandes, imunoglobulinas, albumina | ELISA de sanduíche de anticorpo duplo, ELISA de antígeno |
mais mais | Biomoléculas com propriedades hidrofílicas/hidrofóbicas como: proteínas pequenas a grandes, imunoglobulinas, albumina, LPS, proteínas fosforiladas, glicoproteínas | Anticorpo duplo ELISA, FIA, LIA |
mais mais mais | Glicoproteínas, moléculas lipídicas polares, fosfolipídios, cardiolipídios | ELISA de antígeno |
Captura de afinidade: A captura de afinidade é baseada na ligação específica de macromoléculas marcadas aos seus receptores correspondentes. As macromoléculas marcadas podem ser obtidas por acoplamento químico ou por engenharia genética.
Os recursos da Captura de afinidade são:
1. alta especificidade
2.Pode melhorar a relação sinal-ruído dos resultados de medição
As superfícies de fundo de poço mais comuns são: superfície revestida com estreptavidina (estreptavidina); superfície revestida com quelato de níquel (Nickel Chelate) e superfície revestida com glutationa (Glutationa, GSH).
3. Superfície da estreptavidina: A alta afinidade e especificidade da estreptavidina e biotina são usadas para realizar a ligação da placa inferior à proteína revestida.
4. Superfície de quelato de níquel: o quelato de níquel é fixado à superfície do polímero para ligar proteínas de fusão com marcadores His (histidina).
5. Superfície da glutationa: Uso da especificidade da enzima e do substrato entre a glutationa e a glutationa sulfidrilotransferase (GST) para obter a ligação da placa inferior à proteína de revestimento.

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