Microrganismos são um grupo de organismos microscópicos amplamente distribuídos na natureza e invisíveis a olho nu, incluindo bactérias, espiroquetas, rickettsias, clamídias, micoplasmas, actinomicetos, fungos, vírus, etc., com estrutura simples, e existem em uma única célula, grupo celular ou estado não celular. Sob as condições de fornecimento de nutrientes e ambiente adequado, eles geralmente podem viver de forma independente e crescer rapidamente. Para evitar a morte e poluição de microrganismos, manter basicamente estáveis suas propriedades originais e facilitar a pesquisa e o uso, é necessário utilizar a tecnologia de preservação de cepas. Aqui estão alguns métodos comuns para preservação de bactérias.
Criopreservação
Este método é adequado para a maioria dos microrganismos e vírus que precisam de preservação a longo prazo. O princípio é que no ambiente de temperatura ultrabaixa, a atividade metabólica microbiana para e, geralmente, quanto mais baixa a temperatura, melhor o efeito.
Método de salvamento
Use um tubo de preservação crio para preservar a bactériaria e, ao mesmo tempo, precisam de agentes protetores, como glicerina, pó de carneiro desengordurado ou dimetil sulfóxido. O tubo de armazenamento congelado contendo bactérias é colocado em uma geladeira a - 60~- 80 graus para congelamento e armazenamento.
Método de preservação em parafina líquida
O método de preservação de parafina líquida é aplicável a algumas bactérias que não podem decompor a parafina, como leveduras, bacilos, penicillium, aspergillus, etc. Algumas bactérias e fungos não são adequados para preservação por este método. O método de parafina líquida usa parafina líquida para cobrir, o metabolismo microbiano é inibido e o envelhecimento bacteriano é retardado. O método da parafina pode impedir a entrada de oxigênio, tornando as bactérias aeróbicas incapazes de continuar a crescer. Ao mesmo tempo, se a água no meio de cultura evaporar, é fácil causar a morte bacteriana. O método de parafina pode impedir que a água no meio de cultura evapore e prolongar o tempo de preservação das bactérias.
Método de salvamento
Sob condições estéreis, injete parafina líquida esterilizada na cultura inclinada recém-cultivada, o nível do líquido é 1 cm ~ 2 cm acima do topo da inclinação, adicione uma rolha de borracha e sele com parafina sólida para isolar as bactérias do ar. A cepa injetada com óleo de parafina deve ser armazenada na vertical em local seco a baixa temperatura (4 graus ~ 6 graus) ou em temperatura ambiente.
Método de preservação por liofilização
Este método é adequado para a preservação da maioria dos microrganismos, mas não para fungos filamentosos que não produzem esporos. O método de preservação por liofilização é para preservar as bactérias sob condições de baixa temperatura, secas e anóxicas. Ou seja, congelar rapidamente a cepa em baixa temperatura para manter o microrganismo intacto e, em seguida, descomprimir e extrair o ar para sublimar o gelo até que esteja desidratado e seco, e selar e isolar o ar no estado vazio para interromper a atividade metabólica microbiana , de modo a preservá-lo por um longo tempo.
Método de salvamento
Adicione o agente protetor no tubo da ampola de acordo com determinada fórmula e, em seguida, adicione bactérias para preparar a suspensão bacteriana. Pré-liberar o tubo da ampola até - 15~- 20 graus, depois secar o tubo da ampola com um secador a vácuo e selar o tubo da ampola. Armazenar em baixa temperatura e longe da luz.
Método de preservação do tubo de areia
Este método é adequado para a preservação de actinomicetos esporogênicos, bacilos, etc., mas não para a preservação de fungos e fungos patogênicos que se concentram principalmente no desenvolvimento de hifas. O uso de areia fina para criar condições secas pode retardar as atividades metabólicas dos microorganismos que podem produzir esporos ou esporos em um ambiente seco, inibir sua velocidade de reprodução e ter forte resistência à morte. Este método pode reduzir a mutação da cepa e prolongar o tempo de sobrevivência.
Método de salvamento
Peneire a areia do rio e do mar com 60 mesh, descarte partículas grandes e impurezas e depois peneire com 80 mesh para remover a areia fina. Absorva o ferro com a pedra de absorção de ferro, coloque-o no recipiente e mergulhe-o com ácido clorídrico a 10%. Se houver muita matéria orgânica na areia do rio, mergulhe-a com ácido clorídrico a 20%. Após 24h, retire o ácido clorídrico, mergulhe-o várias vezes em água da torneira até ficar neutro e leve ao forno ou seque a areia. Além disso, dez solos abaixo da superfície não contaminada foram peneirados por 100 dias, lavados até a neutralidade com água da torneira e secos. Misture uniformemente de acordo com a areia: terra=2:1, subembale em tubo de ampola ou tubo de ensaio pequeno, a altura é de cerca de 1 cm, tampe o tampão de algodão, autoclave a 121 graus por 1h ~ 1,5h ou autoclave em pressão normal por 3 vezes, 16 vezes ao dia. Seque abaixo de 50 graus (a temperatura não deve ser muito alta, caso contrário, a matéria orgânica do solo será decomposta por alta temperatura para produzir substâncias nocivas, o que afetará o desempenho da cepa), e pode ser usado apenas se não houver crescimento microbiano após a inspeção.
Em seguida, prepare a suspensão bacteriana e adicione a suspensão bacteriana no tubo de areia. Coloque o tubo de areia contendo suspensão bacteriana no secador a vácuo para secagem a vácuo. Use chama para selar e derreter o bico, armazene-o em baixa temperatura (4 graus ~ 10 graus) ou local seco em temperatura normal e verifique regularmente a vitalidade e as bactérias diversas.
Método de preservação de contas de porcelana
Geralmente, existem tubos de preservação de contas de porcelana acabados que são fáceis de usar no mercado para preservação de bactérias em baixa temperatura. O tubo de preservação de grânulos de porcelana é geralmente composto de um tubo de armazenamento congelado, bem como a solução de preservação interna e grânulos de porcelana. Contas de porcelana com superfície côncava e convexa são usadas para adsorção e preservação de bactérias. A cepa pode ser armazenada por um longo tempo a - 20 graus ou - 80 graus . É mais fácil de operar seja no armazenamento ou na ressuscitação.
Método de salvamento
Raspe a cultura pura de bactérias da placa e coloque-a no tubo de preservação da cultura e configure-a aproximadamente em 3-4 concentrações de Michaelis. Agite para emulsificar as bactérias, lave a solução de preservação, aperte o tubo de preservação e congele em baixa temperatura.
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